Ceditest CSFV-Ag 猪瘟病毒抗原 ELISA 检测试剂盒 检测全血、血浆、血清和组织样品中的猪瘟病毒 (以试剂盒内的英文说明书为准) 一、简介 这些年来,荷兰动物科学与健康研究所(ID-Lelystad)已经建立了控制和消除动物疾病的专业技术 和知识体系。除了进行病因和致病机理的基础研究外,该研究所还为全球的专业实验室和兽医服务机构 提供了病毒学、细菌学、寄生虫学和免疫学研究工具。 古典猪瘟(CSF)需要结合既往病历、临床照片和实验室检测来进行诊断。CSF 的确诊还需要在能 检测样品中的抗体和/或抗原的专业实验室中进行。为了防止 CSFV 的扩散,早期的病毒监测是十分重 要的。对可疑感染猪群的早期检测都是针对 CSFV 抗原而不是针对 CSFV 抗体,因为 CSFV 抗体在感染 后 14 天才出现。 一些试验曾经被用于检测 CSFV 抗原,如直接荧光抗体试验(Ressang, 1973, (1))和直接免疫过氧 化物酶试验(Wensvoort et al, 1986 (2)。通过病毒分离和 ELISA 能检测全血、血浆、血清、白细胞浓缩物 和组织抽提液等样品。从细胞培养基中分离病毒是“金标准”检测方法,但费时、费力;相反,ELISA 是一种简单快速的检测方法,能在短时间内检测大量样品。尽管 ELISA 对新感染猪只的检测受敏感性 的制约(Kaden et al, 1999 (3)),但它仍是一种有价值的CSFV 诊断工具。加大可疑猪群的样品数可提高 诊断的敏感性(Martin et al, 1992 (4))。CSFV 检测方法的选择性是另一个应该被考虑的重要方面。由于猪 群中交叉感染了非 CSFV 的瘟疫病毒,许多检测方法都缺乏选择性。 考虑到 CSFV 是一种需要申报的疾病,假阳性结果(由于缺乏特异性引起)会引发一系列不正确 的措施,所以应该尽量避免假阳性结果的出现。 Ceditest CSFV-Ag 是一种可增加诊断可信度,从而最终确认 CSFV 感染的辅助诊断工具。结合敏 CSFV-Ag(高特异性和选择性)能优先减少假阳性结果。因此 Ceditest 感性最高的试验,Ceditest CSFV-Ag 应该用来检测从出现症状的可疑猪群中采集的样品。 Ceditest CSFV-Ag 具有很高特异性和选择性,是一种优秀的猪瘟感染的辅助诊断工具。需要注意 CSFV-Ag 诊断出的阳性结果应该用“金标准”方法(如病毒分离)加以确证。 的是,用 Ceditest 二、参考文献 1 Ressang, A.A., (1973). Studies on the pathogenesis of hog cholera. I. Demonstration of hog cholera subsequent to oral exposure. Zbl. Vet. Med. B 20, 256 ¨C 271. 2 Wensvoort et al, (1986). Production of monoclonal antibodies against swine fever virus and their use in laboratory diagnosis. Vet. Microbiol. 12, 101 ¨C 108. 3 Kaden et al, (1999). Vergleich labordiagnostischer Methoden zum Nachweis einer Infektion mit dem Virus der Klassischen Schweinepest (KSPV) in der fr¨1hen Infektionsphase: Experimentelle Studie. (Comparison of different diagnostic methods for the detection of classical swine fever virus (CSFV) in the early infection period). Berl. M¨1nch. Tier?rtzl. Wschr., 112, 52 - 57. 4 Martin et al, (1992). Evaluating the health status of herds on tests applied to individuals. Prev. Vet. Med. 14, 33 ¨C 34. 三、应用 Ceditest CSFV-Ag 主要用于检测 CSFV 感染可疑猪群的样品。在进行免疫的 CSF 流行国家和地区, Ceditest CSFV-Ag 还用于检测 CSFV 的残留。为了提供诊断的敏感性,样品的提取者应该操作熟练。而 且,为了提高诊断的可信度,也要结合其他的 CSFV-Ag 的检测方法,如荧光抗体试验和直接(或间接) 免疫过氧化酶试验。 四、原理 The Ceditest CSFV-Ag基于夹心 ELISA 原理。酶标板用 CSFV 特异性抗体包被,第一步,稀释样 品,加待测样品(全血、血清、血浆、凝集白细胞或织抽提液)到所有孔并孵育。第二步,洗涤,并加入 高特异性的抗 CSFV 酶标结合物到所有孔内,孵育一段时间后洗涤。加底物/显色剂孵育后能看见已与 抗体结合的酶标结合物。加终止液终止反应并用酶标仪测量OD 。检测结果用阳性百分率(PP)表 450nm 示。加底物/显色剂溶液后呈现蓝色反应,表明 CSPF-Ag 阳性;不显色或显色微弱,表明 CSFV-Ag 阴 性。 值 100PP, 试剂盒里有 3 份参考样本(标示为 1,2 和3)。假定参考样本 1(标准阳性对照)的 OD 450 其他样品的 OD值与参考样本 1 相比转换成相应的 PP值。参考样本 2 是标准阴性对照,参考样本 3 是 弱阳性对照。参考样本3 用来监控试剂盒的性能。 五、一般评述 本说明书内容的改变不用另行通知。本说明书在出版时是完整而正确的,赛迪诊断公司不承担本说 明书中出现的任何错误。赛迪诊断公司在任何情况下都不应该对操作不当引起的损失负责,也不应该对 经济损失、财产损失或其他由赛迪产品的使用、丢失引起的任何损失负责。 六、试剂盒组成 1. 酶标板 2 块 (2 frames, each with 12 eight-wells strips in an aluminium foil bag) 2. 样品稀释液 2 瓶(直接使用) 3. 1 瓶冻干参考样本 1(强阳性对照)1 vial lyophilized reference 1 (strong positive) 4. 1 瓶冻干参考样本 2(空白对照)1 vial lyophilized reference 2 (blank) 5. 1 瓶冻干参考样本 3(弱阳性对照)1 vial lyophilized reference 3 (weak positive) 6. 1 瓶冻干酶标记物添加剂 1 vial lyophilized conjugate additive 7. 1 瓶浓缩酶标记物 1 vial conjugate (concentrated) 8. 1 瓶去离子水 1 vial demineralized water 9. 1 瓶稀释缓冲液(直接使用)1 vial dilution buffer (ready-to-use) 10. 1 瓶底物/显色剂(直接使用) 1 vial chromogen/substrate (ready-to-use) 11. 1 瓶终止液(直接使用)1 vial stop solution (ready-to-use) 12. 1 瓶浓缩冲洗液 1 vial washing fluid (concentrated) 13. 1 个封口器 1 black closure 14. 1 个封口膜 1 lid to cover the strips during incubation 七、贮存条件 试剂盒不能马上使用,必须恢复到室温。试剂盒必须保存在2-8℃直至过期。 在打开铝箔纸取出酶标板前,先将其恢复至室温(20 ¨C 2℃)。 打开铝箔纸后,取出所需的酶标条,立即把不用的酶标条放回到铝箔纸并用封口器密闭。 重新密封的酶标板必须储存于2-8℃,在过期前的六个月内使用。 八、注意事项 1. 仔细阅读底物/显色剂溶液瓶上的标签内容。 2. 终止液为强酸,避免接触皮肤和眼睛。 3. 试剂盒中的试剂在使用之前必须恢复至室温(20 ¨C 2℃)。 4. 洗涤是影响试剂盒性能的一个关键因素。如参考样本 2的光密度值大于 0.300,原因很可能是洗涤不 充分。 洗涤程序(至少进行 6次):吸取 400ul 洗液至每孔,倒去洗液后重新加入洗液。加洗液时应避免形 成气泡。最后一次洗涤后一定要拍干。当使用自动洗板装置且阴性对照的OD值大于 0.300 时,按上 述方法进行人工洗涤。 5. 待测样品必须保持无菌,以便能在随后的病毒分离试验中得到确认。 6. 待测样品可能含活病毒。立即对使用过的材料(枪头、封条器)和工作间进行消毒是极其重要的。 可使用的消毒剂有 1% 的 Halamid、0.4%的氢氧化钠或 1%的戊二醛(CSFV在 6 分钟内减少 4-5log)。 |